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紅豆杉是常綠喬木,小枝秋天釀成黃綠色或淡紅褐色葉條形,牝牡異株,種子扁圓形。種子用來榨油,也可入藥。屬淺根植物,其主根不明明、側(cè)根發(fā)家,高30米,干徑達(dá)1米。葉螺旋狀互生,基部扭轉(zhuǎn)為二列,條形略微彎曲,長1~2.5cm,寬2~2.5mm,葉緣微反曲,葉的端緣漸尖,葉背有2條寬黃綠色或灰綠色的氣孔帶,中脈上密生有細(xì)小凸點(diǎn),葉緣綠帶極窄,牝牡異株,雄球花常單生于葉腋,雌球花胚珠單生于花軸上部側(cè)生短軸的頂端,基部有圓盤狀的假種皮。種子扁卵圓形,有2棱,種卵圓形,假種皮杯狀,赤色。因?yàn)榧t豆杉的樹皮有抗癌物質(zhì)——紫杉醇,所以有很多人進(jìn)入林中來剝樹皮,使得紅豆杉的數(shù)量急劇下降。
紅豆杉的組織造就技能
(一)、材料
較為適宜的組培外植體為新生的嫩枝,取材時(shí)間以每年的7、8月份為宜
(二)造就進(jìn)程
1、愈傷組織誘導(dǎo)用造就基
造就基的根基身分回收B5或MS的微量元素、有機(jī)物和鐵鹽,外加KNO32500mg/L,NH4NO3825mg/LKpPO4240mg/L,MgSO4?7pO370mg/L,CaCl2?2pO660mg/L。添加的激素種類及數(shù)量為NAA0.8-1.0mg/L、BA0.3-0.5mg/L,調(diào)PH值為5.8-6.0;瓊脂粉和蔗糖用量別離為5.6-6.0g/L和30g/L。設(shè)置好的造就基用造就瓶分裝,經(jīng)高溫、高壓滅菌后備用。
2、材料消毒與接種
取新生的嫩枝(帶有針葉)放入加有0.02%洗潔精的自來水中浸泡10分鐘,浸泡進(jìn)程中需常常攪動(dòng),浸泡結(jié)束后用自來水沖洗10分鐘以上。將嫩枝轉(zhuǎn)入一清潔的三角瓶中。
以下所有操縱必需在超凈工作臺長舉辦無菌操縱。首先往三角瓶中插手75%的酒精,插手量應(yīng)為嫩枝體積的10倍以上,浸泡殺菌30-60秒,倒掉酒精,用無菌蒸餾水年漂洗一次;再將嫩枝轉(zhuǎn)入事先已高壓消毒的三角瓶中,插手15倍與嫩枝體積的0.1%的升汞溶液,浸泡殺菌5-8分鐘,浸泡進(jìn)程中要不絕搖動(dòng),以使升汞與嫩枝充分打仗。為了到達(dá)徹底殺菌的結(jié)果,有人發(fā)起在升汞溶液中插手0.02%的外貌活性劑,這樣大概更好一些,但要相對縮短殺菌時(shí)間。倒掉升汞溶液,用無菌蒸餾水沖洗4-6次,每次1-2分鐘,以徹底撤除升汞。將嫩枝從三角瓶中分批取出,用無菌濾紙吸去材料外貌的水分,將嫩枝切成0.5-0.8CM的小段,并切取部門針葉,嫩枝切段和針葉同時(shí)用作外植體,接種在誘導(dǎo)愈傷組織的造就基上。接種時(shí)要讓針葉的腹面打仗造就基,嫩枝的植物學(xué)近地端打仗造就基。留意用過的升汞溶液和沖洗液不要處處亂倒,以防重金屬污染。將接種好的造就物安排于造就室中造就,溫度(25±2)℃,光照強(qiáng)度1500-2000lx,光照時(shí)間10h/d。
3、愈傷組織誘導(dǎo)
紅豆杉嫩枝和針葉在造就基上2-3周后即開始形成愈傷組織,約4-5周愈傷組織直徑可達(dá)1-2CM。不同種的紅豆杉和不同的外植體之間形成愈傷組織的比率、時(shí)間遲早和生長速度存在明明不同,南邊紅豆杉和東北紅豆杉的嫩枝切段出愈較快,出愈率別離為89%和70%,針葉出愈較慢,出愈率也較低,別離為36%和15%;普通紅豆杉出愈較慢但出愈率較高,嫩枝和針葉的出愈率別離為94%和30%。愈傷組織開始時(shí)為灰白色,跟著愈傷組織的增大,先期形成的愈傷組織顏色由灰白色變?yōu)樽厣?,這大概預(yù)示著愈傷組織在逐漸產(chǎn)生褐變,因此要實(shí)時(shí)給以留意,盡管保持較低的造就溫度和常常改換造就基。當(dāng)愈傷組織生長到必然大小時(shí)即可轉(zhuǎn)入液體舉辦懸浮造就。
4、細(xì)胞懸浮造就與繼代
操作愈傷組織而不是用小苗或大樹來出產(chǎn)提取紫杉醇,是一條正在摸索的途徑,假如樂成則可以實(shí)現(xiàn)工場化出產(chǎn),從基礎(chǔ)上辦理紅豆杉資本不敷的抵牾。因此,通過嫩枝和針葉造就發(fā)生的愈傷組織不需要舉辦芽分化的誘導(dǎo),而是將愈傷組織直接轉(zhuǎn)入細(xì)胞懸浮造就。詳細(xì)做法是將從嫩枝和針葉上發(fā)生的愈傷組織取下來直接轉(zhuǎn)入液體造就基中舉辦振蕩造就,所用造就基與上述誘導(dǎo)造就基溝通。在初次將愈傷轉(zhuǎn)到液體造就基即可適當(dāng)插手少量纖維素酶和果膠酶,以加速愈傷組織疏散成單個(gè)細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)。
在初次懸浮造就階段可用50ml的小三角瓶,每瓶加10ml液體造就基,放入愈傷組織,在20-23℃的搖床上振蕩造就,光照條件與普通造就溝通。每周需要改換一次造就基,改換時(shí)用5-10ml的平頭移液管將三角瓶中的愈傷組織、單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)過濾出來,直接轉(zhuǎn)到新鮮的造就基中即可。在懸浮造就進(jìn)程中應(yīng)隨時(shí)留意每一瓶中愈傷組織、細(xì)胞團(tuán)生長的環(huán)境,挑選生長速度最快和特征最好的作為繼代的材料,絕不行惜的丟掉那些不好的(生長遲鈍、顏色不正等)材料,這樣顛末幾代的選擇,就可以挑出切合抱負(fù)的材料,作為懸浮系舉辦擴(kuò)增造就。
用植物組織造就這種先進(jìn)的造就要領(lǐng),可以或許迅速、大量的出產(chǎn)出今朝人類急需的紅豆杉,可以或許為癌癥的治療提供很大的利便,社會(huì)以及努力效益都很是的明明。
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