鉆石玫瑰(Rosasp.)，薔薇科薔薇屬多年生花卉，為微型月季的一種，因其花枝短小,花朵如豆扣般大小,故美其名曰“鉆石玫瑰”或“袖珍玫瑰”。鉆石玫瑰除具有一般月季花容秀美、芬芳馥郁、四季常開(kāi)等特點(diǎn)外,還具有分枝多、株型矮小緊湊、耐寒、耐熱、適應(yīng)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),是現(xiàn)代城市綠化不能更換的材料，深受人們的喜歡[1]。現(xiàn)在鉆石玫瑰重要靠扦插繁殖,繁殖率低、速度慢,且后裔出現(xiàn)品質(zhì)降低現(xiàn)象，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求。為此,我們開(kāi)展了鉆石玫瑰組培快繁技術(shù)研究,擬用工廠化育苗措施解決常規(guī)生產(chǎn)所面臨的問(wèn)題。1材料與方式1.1外植體的成立 供試材料采自重慶市園林綠化科學(xué)研究所品種圃從北京引進(jìn)已種植馴化2年的鉆石玫瑰品種“紫色期間”昔時(shí)生植株。 剪取優(yōu)良結(jié)實(shí)株昔時(shí)生枝條中段帶側(cè)芽的未木質(zhì)化或半木質(zhì)化莖段,用毛刷蘸肥皂水輕輕刷洗后流水沖洗1～2h,再剪成1.0～1.5cm左右?guī)б秆康那o段;超凈臺(tái)上，將莖段先用70%酒精溶液浸泡30s,無(wú)菌水沖洗2～3次，再置于0.1%升汞溶液中消毒9～12min,然后用無(wú)菌水沖洗3～4次,以備接種。1.2離體芽的誘導(dǎo)培育 將無(wú)菌莖段接種于誘導(dǎo)培育基上誘導(dǎo)萌芽。誘導(dǎo)培育基以MS為基本培育基,附加不同濃度的細(xì)胞盤據(jù)素6-BA和生長(zhǎng)素NAA，共組成5種培育基：MS+6-BA0.30mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L,MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.20mg/L,MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.10mg/L。每種培育基均接種20個(gè)離體芽,培育6周后統(tǒng)計(jì)芽誘導(dǎo)分化率(見(jiàn)表1)。1.3叢生芽的繼代增殖培育 將誘導(dǎo)培育基上已萌發(fā)的嫩芽切下轉(zhuǎn)接到4種繼代培育基中繼代增殖。繼代培育基劃分MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L，MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.20mg/L。每種培育基接種30個(gè)嫩芽,接種時(shí)單芽莖段長(zhǎng)0.5～1.0cm左右,培育3周后統(tǒng)計(jì)叢生芽的數(shù)目以及高于2cm的芽數(shù)(見(jiàn)表2)。1.4試管苗的生根培育 選取繼代培育中生長(zhǎng)結(jié)實(shí)的叢生芽,剪成1.2～1.5cm長(zhǎng)的單芽莖段，轉(zhuǎn)接到生根培育基上。培育基配方為：1/2MS+NAA0.10mg/L，1/2MS+IBA0.1mg/L，1/2MS+NAA0.20mg/L，1/2MS+IBA0.20mg/L，1/2MS+NAA0.50mg/L，1/2MS+IBA0.50mg/L。每種培育基接種30個(gè)莖段，接種15天后統(tǒng)計(jì)幼苗生根情況(見(jiàn)表3)。 以上MS培育基中的白砂糖濃度均為30.0g/L，1/2MS培育基中白砂糖濃度為20.0g/L，瓊脂均為3.5g/L,pH5.8，培育室溫度23(±2)℃,光照強(qiáng)度2000～2500Lx，光照時(shí)間10～12h/d。2效果與分解2.1離體芽的誘導(dǎo)效果 鉆石玫瑰離體芽的誘導(dǎo)較慢,接種4周后離體芽才開(kāi)始萌動(dòng)，但芽萌動(dòng)后的生長(zhǎng)情況因培育基內(nèi)激素濃度的不同而不同。由表1可知，MS+6-BA0.30mg+NAA0.10mg/L培育基叢生芽少,由于6-BA濃度太低，芽分化相對(duì)較差，分化率為70%,但叢生芽在培育基中生長(zhǎng)結(jié)實(shí)；在MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L培育基上,叢生芽相對(duì)較少,芽分化率為105%,且叢生芽生長(zhǎng)細(xì)弱，說(shuō)明該培育基中6-BA和NAA濃度配比不當(dāng)；在MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.10mg/L培育由于6-BA濃渡過(guò)高,離體芽萌動(dòng)后僅發(fā)生愈傷組織,未分化出叢生芽；MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L和MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L兩種培育基上,20個(gè)離體芽分化出的叢生芽劃分為49個(gè)和39個(gè)，分化率劃分達(dá)245%和195%,且叢生芽生長(zhǎng)結(jié)實(shí)。重復(fù)試驗(yàn)，篩選出適宜離體芽誘導(dǎo)的培育基為MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10～0.20mg/L。2.2叢生芽的繼代增殖效果 從表2可以看出，鉆石玫瑰在所采取的4種繼代增殖培育基上培育3周后，芽的增殖倍數(shù)和大于2cm芽的比率存在不同。其中：MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L和MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L兩種培育基上，增殖的叢生芽多，且芽生長(zhǎng)結(jié)實(shí)，芽的增殖倍數(shù)劃分為5.67倍和5.2倍，大于2cm的芽占75.29%和71.79%，顯著高于其它培育基；在MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L培育基上，芽生長(zhǎng)細(xì)弱，叢生芽少，增殖倍數(shù)僅為2.1倍，大于2cm的芽占18.75%；MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.20mg/L培育基由于6-BA濃渡過(guò)高，繼代芽發(fā)生愈傷組織后截至生長(zhǎng)分化。重復(fù)試驗(yàn)，篩選出適宜鉆石玫瑰繼代增殖的培育基為MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L。2.3試管苗生根培育效果 從表3看出，鉆石玫瑰在所用的6種培育基上培育15天后統(tǒng)計(jì)效果，試管苗的生根率為13.3%～90%，生根數(shù)為4～243根，均勻根長(zhǎng)為0.26～1.5cm。在1/2MS+NAA0.20mg/L、1/2MS+NAA0.50mg/L、1/2MS+IB0.20mg/L、1/2MS+IBA0.50mg/L培育基上，試管苗10d開(kāi)始生根,生根率劃分為60%、23.3%、13.3%和30%，根數(shù)劃分為90根、14根、4根和27根，均勻根長(zhǎng)劃分為0.35cm、0.26cm、0.6cm和0.45cm，且由于生長(zhǎng)素濃渡過(guò)高，15d后根均釀成深褐色，截至生長(zhǎng)后逐步死亡。在1/2MS+IBA0.10mg/L和1/2MS+NAA0.10mg/L培育基上，培育9d開(kāi)始生根,根系發(fā)達(dá),發(fā)育良好,生根率達(dá)63.3%和90%,均勻根數(shù)8根和9根,均勻根長(zhǎng)1.1cm和1.5cm，均顯著高于上述4種培育基，且小苗和根長(zhǎng)勢(shì)均良好。重復(fù)試驗(yàn)，在設(shè)計(jì)的6種培育基中,1/2MS+NAA0.10mg/L培育基上生根較好。2.4生根試管苗的馴化移栽 將生根試管苗放在室外光線明亮的地方，閉瓶煉苗2～3d，再逐漸開(kāi)瓶煉苗2～3d，讓植株擔(dān)當(dāng)試管外環(huán)境的磨煉后取出試管苗洗凈基部粘附的培育基，移植于珍珠巖：腐殖土：爐雜為1：3：3的基質(zhì)中，澆濃度為0.8g/kg多菌靈溶液，遮蔭保濕，空氣濕度保持在60%～70%，當(dāng)植株萌發(fā)新根后讓其逐漸見(jiàn)光，并降低濕度，直至露出在外界條件下，移栽成活率可達(dá)75%～80%。3小結(jié)與討論3.1細(xì)胞盤據(jù)素6-BA和生長(zhǎng)素NAA作為外源激素加入培育基后,對(duì)鉆石玫瑰離體芽的誘導(dǎo)及分化影響十分顯著。適宜鉆石玫瑰離體芽誘導(dǎo)的培育基為：MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10～0.20mg/L；較佳繼代增殖培育基為MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L。3.2鉆石玫瑰在試管內(nèi)生根需較低濃度的生長(zhǎng)素NAA和IBA，當(dāng)NAA或IBA大于2.0mg/L時(shí)，鉆石玫瑰雖能發(fā)生根,但根隨即變褐截至生長(zhǎng)后死亡。試驗(yàn)效果解釋，誘導(dǎo)鉆石玫瑰試管苗生根的較佳培育基為1/2MS+NAA0.10mg/L，生根率可達(dá)90%。3.3組織培育方式可以提高鉆石玫瑰的繁殖速度，且植株根系發(fā)達(dá)，苗木生長(zhǎng)結(jié)實(shí)、整齊,是批量繁殖鉆石玫瑰商品苗的一種好方式。