芍藥是我國聞名的觀賞、藥用植物，經(jīng)過幾千年的人工栽植選育，芍藥優(yōu)良品種的雄蕊、雌蕊大部門瓣化，結(jié)實(shí)率低，且由于異花授粉，種子也無法保持母本的優(yōu)良性狀。芍藥繁殖重要以分株為主，繁殖系數(shù)低，給芍藥產(chǎn)業(yè)化生長帶來困難。芍藥的離體培育研究現(xiàn)在做得較少，現(xiàn)將芍藥離體組織培育方式介紹如下： 供試材料中，種子、胚和上胚軸選自單瓣品種‘罌粟子’昔時(shí)套袋成熟豐滿的種子，莖尖選自重瓣型品種的休眠芽。 種子采集接種時(shí)間劃分為8月、10月、1月、3月，培育基選用1／2MS固體培育基，遮光處理。種子胚根長至3厘米以上時(shí)置于冰箱中4℃冷藏30天，后轉(zhuǎn)至日間25℃、夜晚18℃的地方。葉片睜開后舉行芽增殖培育，光照每天12小時(shí)，光強(qiáng)1500至2000勒克斯。 試驗(yàn)效果顯示，用芍藥種子作為外植體應(yīng)保留種皮。去除種皮的種子接種2周后極易褐變被污染而死亡。少數(shù)種子的胚根伸長0.5厘米，也出現(xiàn)生長截至、逐漸死亡的現(xiàn)象。去除種皮使種子的胚乳與培育基直接接觸，易導(dǎo)致褐變。未去除種皮的種子在40天左右陸續(xù)裂口，長出胚根。 種子在試管中生根后，根生長緩慢，3個(gè)月未見上胚軸發(fā)芽展葉，且逐漸褐變死亡。而將發(fā)根后的試管苗置于冰箱中4℃冷藏，胚根生長加速，35天后上胚軸頂芽露出，轉(zhuǎn)至組培室中。7天后子葉中心頂芽開始萌動(dòng)，葉生長，20天后葉柄伸長睜開。一般一粒種子僅睜開一兩片葉子，少數(shù)種子形成兩個(gè)胚軸，睜開三四片真葉。 試驗(yàn)效果注釋，以8月、10月、1月接種的種子成活率較高，需經(jīng)過40至60天后才開始生根，經(jīng)過低溫處理，打破上胚軸休眠后多數(shù)能展葉。 芍藥種子萌發(fā)的實(shí)生無菌苗生長緩慢，與自然界中芍藥實(shí)生苗一樣，只生長一兩個(gè)葉片，無法延續(xù)生長。在所試的5種培育基上，不同時(shí)期的種子無菌苗均不能增殖和生長。切取無菌苗的上胚軸轉(zhuǎn)接后，也不能分化出叢芽，重要顯示為上胚軸對不同濃度的BA(細(xì)胞盤據(jù)素)、GA(赤霉素)均不敏感，生甜頭于停滯狀態(tài)，部門外植體基部發(fā)生褐變，部門芽尖、葉逐漸枯死。 胚與上胚軸的培育，接種至1／2MS＋BA＋0.2NAA(萘乙酸)和1／2MS＋0.5BA等培育基，pH值調(diào)至5.8。為防止褐變，每升添加50至100毫克維生素C，0.3％至0.5％活性炭，培育室溫度25℃±1，每天光照10小時(shí)，光強(qiáng)2000勒克斯。 去除了胚乳的胚體積很小，僅兩三毫米，接種在培育基上20天后子葉能在試管中睜開，胚根稍有伸長，但胚芽始終未見生長，轉(zhuǎn)接至不同培育基效果相同。緣故原因很可能是種子胚乳中存在一定活性物質(zhì)或胚中存在一定抑制物質(zhì)，只有與胚乳和胚根配合生長，合成的某種促進(jìn)物質(zhì)或排除抑制物質(zhì)可以協(xié)調(diào)內(nèi)源激素關(guān)系，促進(jìn)胚芽生長。 低溫打破休眠后將上胚軸接種在培育基上。30天之后，葉柄伸長，葉睜開，較小，外面皺縮，比接種的種子無菌苗小，易發(fā)生褐變。培育基添加活性炭后，可顯著削減褐變污染。幼苗形成后即出現(xiàn)生長停滯狀態(tài)，轉(zhuǎn)接含不同激素的培育基，變化不大。推測上胚軸生長后處于生理休眠期，休眠排除可能需要一個(gè)變溫歷程。莖尖培育一部門取地栽苗的休眠芽，剪取帶芽鱗的莖尖舉行試驗(yàn)，另一部門于9月下旬掘起植株，置于4℃濕土中，5周后取芽。除去芽鱗，切取莖尖，用0．1％次氯酸鈉溶液消毒15分鐘，無菌水沖洗3至5次，劃分接種到以下3種培育基中： ①1／2MS＋0.5BA＋GA ②1／2MS＋1.5BA＋0.5KT ③1／2MS＋1.0BA＋0.5GA pH值5.6，蔗糖3％，瓊脂0.8％，50毫克／升維生素C，培育室溫度25℃±1，每天光照14小時(shí)，光強(qiáng)2000勒克斯。 不同取樣時(shí)間對莖尖培育有影響。露地栽植取材時(shí)間在10月至11月，或于9月下旬掘起莖芽，置4℃冷藏處理5至6周，成活率和分化率較高。此時(shí)接種，休眠芽萌動(dòng)，生長迅速，分化的試管苗結(jié)實(shí)。取材時(shí)間在2月，4℃冷藏8至9周的大部門材料芽鱗已經(jīng)裂開，芽已伸長，消毒困難，污染率高。其他時(shí)間因芽的休眠尚未徹底排除，內(nèi)部存在抑制物質(zhì)，生長緩慢，成活率和分化率均較低。因此，莖尖培育的適宜取材時(shí)間應(yīng)為10至11月或4℃冷藏5至6周。 從不同培育基對芽增殖的影響來看，BA和GA組合的培育基芽分化效果優(yōu)于BA與KT組合。1.5BA＋0.5KT培育基中叢生芽、葉片數(shù)目較少，苗生長較高。在添加BA、GA的培育基中，叢生芽、葉片數(shù)目較多，苗壯。繼代培育中，切取誘導(dǎo)芽單芽接種，35至40天后基部形成新芽。但隨著代數(shù)增添，叢生芽和葉的數(shù)目逐漸削減，苗生長變?nèi)?，部門芽尖、葉枯死，出現(xiàn)白化苗。到第四代已基本轉(zhuǎn)為玻璃苗、白化苗，褐變嚴(yán)重。芽增殖以1／2MS附加0.5BA和1.0GA為較佳培育基。